基因枪的所有操作均在无菌条件下进行,具体步骤如下:
1、基因枪所在位置及超净工作台在紫外灯下灭菌1.5h。
2、用70%乙醇对基因枪表面及样品室进行消毒。同时,用70%乙醇将阻挡网和可裂圆片,微弹载体及固定器、固定工具浸泡15min,放在超净台上晾干。可裂膜片、固定盖、微弹载体发射装置可用70%乙醇进行表面灭菌。
3、将微粒载片嵌入固定环中,取DNA及金粉的混合物加于微粒载片中心,干燥2 min左右。
4、安装可裂膜于其托座上,顺时针固定到气体加速器上。
5、将空间环、阻挡网、阻挡网托座、微粒载片及固定环(带有微粒的面朝下)安装好,插入枪体中。
6、被轰击的样品根据参数距离放入轰击室中合适位置,关好轰击室门。
7、打开氦气瓶的总阀,顺时针调节气压,使氦压表的示数高于可裂膜压力200psi。
8、打开基因枪及变压器开关。
9、按动真空键,待真空度至26~28inHg(=88.05~94.82kPa)时,迅速按下Hold键,接着按住发射键,并保持不动,直至轰击为止。
10、按通气键待真空表归零后,取出样品。
11、关机:a. 把氦气瓶的总开关旋紧,打一次空枪,把氦压表指针归零后,再逆时针旋转氦压表调节阀;b. 关闭基因枪的总开关及变压器开关。
注意事项:
1. 基因枪和超净工作台一定要灭菌充分。
2. 整个操作过程中,一定要注意高浓度酒精使用的安全问题。
3. 微粒发射装置的组装一定要顺序进行。
4. 轰击过的微粒发射装置要放到乙醇中灭菌,以免造成不必要的污染。
5. 轰击试验完毕要严格按照步骤关闭氦气瓶和基因枪。